蛋白質(zhì)提取試劑核蛋白抽提試劑盒
貨號 ：R0050
規(guī)格 ：50T/100T

產(chǎn)品內(nèi)容 ：

保存 ：核/漿蛋白抽提試劑 4℃保存，PMSF 于-20 ℃保存。

產(chǎn)品簡介：
    本試劑盒提供了一種簡單、方便的從培養(yǎng)細胞或新鮮組織中抽提核蛋白的方法。整個過程只需約 60 分鐘就可以將核蛋白和漿蛋白從細胞中分離出來。 得到的蛋白可以用于 Western blot 等實驗。 本試劑盒通過漿蛋白抽提試劑使細胞膨脹破裂，釋放出胞漿蛋白，再通過離心得到細胞核。然后通過核蛋白抽提試劑抽提得到細胞核蛋白。本試劑盒可以抽提 50/100 個樣品（每個樣品約 2×10 6 個 Hela 細胞，40mg）。

操作方法 ：
    裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。
    一 、 對于體外培養(yǎng)細胞 ：
    1．根據(jù)用量取適當?shù)臐{蛋白抽提試劑和核蛋白抽提試劑加入 PMSF，使 PMSF 的終濃度為 1mM。PMSF需現(xiàn)用現(xiàn)加，若目標蛋白含有豐富的半胱氨酸，可以在兩種蛋白抽提液中加入 DTT 終濃度 0.5mM。
    2．對于貼壁細胞，去除培養(yǎng)液，用 PBS 洗一遍，用細胞刮刀收集細胞，或用 EDTA 消化后吹打下細胞（好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白） 。500 g 離心 2～3 分鐘收集細胞，吸盡上清留下沉淀備用。
    3．對于懸浮細胞：用 PBS 洗一遍，500 g 離心 2～3 分鐘收集細胞，吸盡上清，留下細胞沉淀備用。
    4．每 20ul 細胞沉淀加入 200ul 漿蛋白抽提試劑（2×10 6 個細胞沉淀約 20ul 或 40mg） 。
    5．用移液器吹打或高速渦旋 15 秒（可適當延長） ，必須使細胞沉淀*分散開成單細胞懸液。細胞沉淀分散不*會導(dǎo)致蛋白產(chǎn)量降低。
    6．冰浴 10 分鐘。
    7．高轉(zhuǎn)速劇烈渦旋 10 秒，4℃ 12000～16000g 離心 10 分鐘。
    8．上清即為抽提得到的細胞漿蛋白，立即吸取上清預(yù)冷的樣品管中備用，進行后續(xù)的 PAGE、Western 等實驗，但蛋白濃度較低，可根據(jù)需要進行相應(yīng)濃縮。
    9．沉淀即為細胞核，要*吸盡殘余的上清（避免細胞漿蛋白的污染） ，加入 50-100ul 核蛋白抽提試劑。
   10．用移液器吹打或高速渦旋 15 秒（可適當延長）沉淀*分開，冰浴 10 分鐘。
   11．高轉(zhuǎn)速劇烈渦旋 10 秒，4℃12000～16000g 離心 10 分鐘。
   12．立即吸取上清預(yù)冷的樣品管中，此即為抽提得到的細胞核蛋白?？蛇M行后續(xù)實驗或-70℃凍存。

對于組織樣品：
    把組織稱重后，盡可能切成非常細小的碎片，按每 50mg 組織加入 200ul-500ul PBS，用勻漿器冰上勻漿制成細胞懸液，500 g 離心 2～3 分鐘收集細胞，吸盡上清，收集沉淀。加入 200ul 漿蛋白抽提試劑后接上述步驟 5。

注意事項 ：
    1．裂解得到的蛋白樣品，由于含有較高濃度的去垢劑干擾，不能用 Bradford 法測定蛋白濃度，可以選用本公司生產(chǎn)的 BCA 蛋白定量試劑盒(貨號 PC0020)測定蛋白濃度。
    2．對于組織樣品，本試劑盒適用于新鮮組織，對凍存組織抽提效果較差。
    3．為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

相關(guān)產(chǎn)品 ：

P1020  1×PBS ， PH7.2-7.4 ， 0.01M
P1010  4× 蛋白上樣緩沖液（含 β- 巰基乙醇）
S1010  10% SDS
PR1400  低分子量蛋白 MARKER
PC002  BCA 法蛋白濃度測定試劑盒
PC0030 Lowry 法蛋白濃度測定試劑盒

蛋白質(zhì)提取試劑核蛋白抽提試劑盒

參考文獻：
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《β?elemene inhibits oxygen?induced retinal neovascularization via promoting miR?27a and reducing VEGF expression》 作者:Weilai Zhang, Lei Chen ,Jin Geng, Limin Liu, Li Xu 期刊:Molecular Medicine Reports 影響因子:1.851 PMID:30664207