食品中亞硝酸鹽含量檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC1495
規(guī)格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
1、標準品：1μmol/mL亞*標準溶液。將標準品用蒸餾水稀釋成0.04µmol/mL備用。
產品說明：
在食品中，亞硝酸鹽可與肉品中的肌紅素結合而更安定，在食品加工業(yè)中作為保色劑，以維持肉制品的良好外觀，并防止肉毒梭狀芽孢桿菌的產生，提高食用肉制品的安全，但是人體長期攝入亞硝酸鹽過量的食品，可誘發(fā)消化系統(tǒng)癌變。
在酸性條件下，亞硝酸鹽與對氨基 苯磺酸反應生成重氮化合物，再與N-1-萘基乙二 胺形成紫紅色偶氮化合物，在540nm處有特征吸收峰。
技術指標：
低檢出限：0.0011164 μmol/mL
線性范圍：0.00125-0.2 μmol/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
天平、研缽/勻漿器、水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
稱取樣本約0.5g，破碎，加入0.5mL 提取液一，沸水浴15min，冷卻至室溫，加入0.5mL提取液二，震蕩搖勻，加0.5mL 提取液三，用鑷子加少量提取液四（約1mg），靜置30min，10000rpm離心15min，取上清液待測。




二、測定步驟：

1. 可見分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至540nm，蒸餾水調零。

2. 操作表

三、亞硝酸含量計算：
1、按樣本質量計算：
亞硝酸含量（μmol/g 質量）=(A樣本-A空白）÷[(A標準-A空白)÷C標準] ×V樣本÷(W×V樣本÷V總)
=0.06×[(A樣本-A空白）÷(A標準-A空白)]÷W
2、按樣本蛋白濃度計算：
亞硝酸含量（μmol/mg prot）=(A樣本-A空白）÷[(A標準-A空白)÷C標準] ×V樣本÷(Cpr×V樣本)
                         =0.04×[(A樣本-A空白）÷(A標準-A空白)]÷Cpr
V總：加入提取液體積，1.5mL；V樣本：反應中樣本體積，0.1mL；C標準：標準溶液濃度，0.04μmol/mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。

注意事項：

1. 試劑對人體有一定的危害，請穿實驗服，戴手套操作。

2. 如果樣本吸光值大于1.5，建議將樣本用蒸餾水稀釋后進行測定。

實驗實例：

1. 取0.5g咸菜破碎加入0.5mL提取液一，之后按提取步驟進行提取，取上清后按照測定步驟操作，使用96孔板測得計算A樣本=0.078、A空白=0.040、A標準=0.413，按樣本質量計算含量得：

亞硝酸含量（μmol/g 質量）=0.06×[(A樣本-A空白）÷(A標準-A空白)]÷W=0.012 μmol/g質量。 

1. 取0.5g火腿破碎加入0.5mL提取液一，之后按提取步驟進行提取，取上清后按照測定步驟操作，使用96孔板測得計算A樣本=0.069、A空白=0.040、A標準=0.413，按樣本質量計算含量得：

亞硝酸含量（μmol/g 質量）=0.06×[(A樣本-A空白）÷(A標準-A空白)]÷W=0.009 μmol/g質量。 
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