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當(dāng)前位置:首頁產(chǎn)品中心生化檢測試劑盒-常量法糖代謝系列BC3615-100T/48S堿性木聚糖酶活性檢測試劑盒 糖代謝

堿性木聚糖酶活性檢測試劑盒 糖代謝
產(chǎn)品簡介:

儲存條件
2-8℃
中文名稱
堿性木聚糖酶活性檢測試劑盒 糖代謝
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Alkaline Xylanase(BAX)Activity Assay Kit
別名
堿性木聚糖酶試劑盒 堿性木聚糖酶測試盒
檢測方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
規(guī)格
100T/48S

產(chǎn)品型號:BC3615-100T/48S

更新時間:2024-07-09

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

訪 問 量 :1280

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產(chǎn)品介紹


堿性木聚糖酶(BAX)活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號:BC3615
規(guī)格:100T/48S
產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱規(guī)格保存條件
緩沖液液體70 mL×1瓶2-8℃保存
試劑一液體8 mL×1瓶2-8℃保存
試劑二液體12 mL×1瓶2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1支2-8℃保存

溶液的配制:

  1. 標(biāo)準(zhǔn)品:10mg木糖。臨用前加入667μL蒸餾水配制成100μmol/mL的木糖標(biāo)準(zhǔn)液,2-8℃保存8周。

產(chǎn)品說明:
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生,能催化水解木聚糖,也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶,可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖,降低釀造中物料的粘度,促進有效物質(zhì)的釋放,以及降低飼料中的非淀粉多糖,促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用,因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中,堿性木聚糖酶(BAX)一般分離自最適生長pH為9-11的微生物。
BAX在堿性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng),在540nm處有特征吸收峰,反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比,通過測定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率,可計算BAX活力。


注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低溫離心機、水浴鍋、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
1、發(fā)酵液:發(fā)酵液于8000rpm,4℃,離心15min,取上清,置冰上作為待測樣本。
2、組織樣本:稱0.1g組織,加入1mL緩沖液,冰上充分研磨。4℃,8000rpm離心15min,取上清置冰上待測。
3、酶干粉:稱1mg,加1mL緩沖液溶解后置冰上待測。
注:含還原糖較高的樣本(如植物果實等)可用蒸餾水進行適當(dāng)稀釋后再進行測定。
二、測定步驟

  1. 可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至540nm,分光光度計用蒸餾水調(diào)零。

  2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋:臨用前按下表將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為6、5、4、3、2、1μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液待測。

序號稀釋前濃度(μmol/mL)標(biāo)準(zhǔn)品體積(μL)蒸餾水體積(μL)稀釋后濃度(μmol/mL)
110010090010
210120806
3101001005
410801204
510601403
610401602
710403601

備注:實驗中每管需要60μL。

  1. 樣本測定(在EP管中加入下列試劑)

試劑名稱(μL)對照管測定管空白管標(biāo)準(zhǔn)管
樣本6060--
標(biāo)準(zhǔn)品---60
蒸餾水--60-
緩沖液90909090
試劑一-606060
渦旋混勻,置于50℃水浴鍋中反應(yīng)30min,立即沸水浴中10min滅活。(注意不要讓蓋子爆開,以免進水,改變了反應(yīng)體系)
試劑一60---
試劑二90909090
渦旋混勻,沸水浴中準(zhǔn)確顯色5min(注意不要讓蓋子爆開,以免進水改變了反應(yīng)體系),冷卻至室溫后,吸取200μL于96孔板或微量玻璃比色皿中,盡快測定各管540nm下的吸光度,分別記為A對照、A測定、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。計算ΔA測定=A測定-A對照,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白??瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)曲線只需測1-2次。每個測定管需設(shè)一個對照管。


注意事項:
吸光度變化應(yīng)該控制在0.01~1.2之間,否則加大樣本量或稀釋樣本,注意同步修改計算公式中的稀釋倍數(shù)。
實驗實例:

  1. 取0.1179g橙子加入1mL緩沖液進行勻漿研磨,取上清用蒸餾水稀釋10倍后按照測定步驟操作,用96孔板測得ΔA測定=A測定- A對照=1.194-1.040=0.154,帶入標(biāo)曲y=0.2017x-0.1171(R2=0.999),計算x=1.344,按樣本質(zhì)量計算BAX活性得:BAX活力(U/g 質(zhì)量)= x÷W2÷30×F =1.344÷0.1179÷30×10=3.80 U/g 質(zhì)量。

  2. 取泡菜汁離心取上清按照測定步驟操作,用96孔板測得ΔA測定=A測定- A對照=0.925-0.169=0.756,帶入標(biāo)曲y=0.2017x-0.1171(R2=0.999),計算x=4.329,按發(fā)酵液計算BAX活力得:BAX活力(U/mL)= x÷T×F =4.329÷30×1=0.144U/mL。

相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC2600/BC2605  酸性木聚糖酶(ACX)活性檢測試劑盒
BC2590/BC2595  中性木聚糖酶(NEX)活性檢測試劑盒
BC2620/BC2625  β-木糖苷酶活性檢測試劑盒

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