植物根系活力檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

微量法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作

貨號(hào)：BC529

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑三：臨用前加入18 mL蒸餾水，充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。未用完的試劑2-8℃可以保存4周。

2、 標(biāo)準(zhǔn)品：0.4 mg/mL α-標(biāo)準(zhǔn)品。

產(chǎn)品說(shuō)明：

根系是植物吸收水分和礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)的主要器官，同時(shí)又是植物體中重要物質(zhì)如氨基酸、激素等物質(zhì)合成、同化、轉(zhuǎn)化的器官，因此根的生長(zhǎng)情況和活動(dòng)能力直接影響植物個(gè)體的生長(zhǎng)情況、營(yíng)養(yǎng)水平和產(chǎn)量水平等，根系活力具有重要的實(shí)際意義。

植物根系能氧化吸附在根表面的α-，生成紅色的α-羥基-1-，沉淀于有氧化力的根的表面，使這部分染成紅色。α-在酸性條件下于對(duì)氨基 苯磺酸鈉和亞硝酸鹽作用生成紅色的偶氮染料。根系活力可以通過(guò)α-減少量來(lái)表示。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、濾紙、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

樣本的制備：將根部組織洗凈，去除根上的泥土，輕輕擦干，不要過(guò)分?jǐn)D壓破壞根系細(xì)胞。稱取0.2g于5mL EP 管中。

二、測(cè)定步驟

1、 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至520nm，可見分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。

2、 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：將0.4mg/mL α-標(biāo)準(zhǔn)品用試劑一稀釋為0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.0015625mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品。（0mg/mL記為標(biāo)準(zhǔn)空白管）

3、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表：

備注：下述實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需75µL標(biāo)準(zhǔn)品（注意不要在此步驟直接檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品吸光值）。

4、在5mLEP管按下表步驟加樣：

充分混勻，室溫顯色20min，取200μL于微量玻璃比色皿或96孔板中，測(cè)定在520nm處的吸光度，顯色后需要在20min內(nèi)完成檢測(cè)。10min所對(duì)應(yīng)的吸光值記作A1，3h10min所對(duì)應(yīng)的吸光值記作A2。計(jì)算?A測(cè)定=A1_測(cè)定-A2_測(cè)定，?A空白=A1_空白-A2_空白，?A =?A測(cè)定-?空白，?A標(biāo)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白管。（標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需做1-2次。）

三、根系活力計(jì)算

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標(biāo)（y，ΔA標(biāo)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA（y，?A）帶入公式計(jì)算樣本濃度（x，mg/mL）。

2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算：以氧化的α-的量來(lái)表示根系活力

根系活力 [ μg / (g·h) ]=x×V試劑二×10³÷(W×T)=666.67×x÷W

10³：?jiǎn)挝粨Q算，1mg/mL=10³μg /mL；V試劑二：試劑二的體積，2mL；W：根系質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，3h。

注意事項(xiàng)：

1、 在EP管/96孔板內(nèi)加入試劑三、試劑四以及樣本的順序不可改變。

2、 如果?A結(jié)果不在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，可以減少樣本質(zhì)量（或者減少第一步反應(yīng)時(shí)間）或者增加樣本質(zhì)量（或者增加第一步反應(yīng)時(shí)間）。

3、 顯色后需要在20min內(nèi)完成檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1、 稱取0.2081g豆芽的根部，洗凈，擦干，按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)得計(jì)算?A測(cè)定=A1_測(cè)定-A2_測(cè)定=1.449-1.328=0.121，?A空白=A1_空白-A2_空白=1.555-1.487=0.068，?A =?A測(cè)定-?A空白=0.121-0.068=0.053，標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=3.2172x+0.0031，計(jì)算得x=0.016mg/mL,帶入公式計(jì)算：

根系活力 [ μg / (g·h) ] = 666.67×x÷W=51.25 μg / (g·h)

2、 稱取0.2031g景天的根部，洗凈，擦干，按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)得計(jì)算?A測(cè)定=A1_測(cè)定-A2_測(cè)定=1.517-1.424=0.093，?A空白=A1_空白-A2_空白=1.555-1.487=0.068，?A =?A測(cè)定-?A空白=0.093-0.068=0.025，標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=3.2172x+0.0031，計(jì)算得x=0.007mg/mL,帶入公式計(jì)算：

根系活力 [ μg / (g·h) ] = 666.67×x÷W=22.98 μg / (g·h)

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