北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC5720-50T/24S
更新時間：2024-04-23
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1015
010-50973130
產(chǎn)品分類
土壤酸性木聚糖酶（S-ACX）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC5720
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
溶液的配制：
1、 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的配制：臨用前按緩沖液：試劑一=4.8mL：2.4mL（7.2mL，約一條標(biāo)曲稀釋用量）的比例進(jìn)行配制，現(xiàn)配現(xiàn)用。
2、 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg木糖。臨用前加入667μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液配制成100μmol/mL的木糖標(biāo)準(zhǔn)液，2-8℃保存8周。
產(chǎn)品說明：
土壤酸性木聚糖酶（Soil acid xylanase, S-ACX），又稱為土壤酸性半纖維素酶，主要分離自最適生長pH為4-5的微生物。
在酸性環(huán)境中，S-ACX催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率，可計算S-ACX活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、天平、低溫離心機(jī)、水浴鍋、研缽、30~50目篩、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。
二、測定步驟
1、 可見分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，用蒸餾水調(diào)零。
2、 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：臨用前將標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋為1.5、1.2、1、0.8、0.6、0.4μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液待測。
3、 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表：
稀釋前濃度（μmol/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)品體積（μL） | 稀釋液體積（μL） | 稀釋后濃度（μmol/mL） | |
1 | 100 | 100 | 900 | 10 |
2 | 10 | 150 | 850 | 1.5 |
3 | 10 | 120 | 880 | 1.2 |
4 | 10 | 150 | 1350 | 1 |
5 | 1 | 400 | 100 | 0.8 |
6 | 1 | 300 | 200 | 0.6 |
7 | 1 | 200 | 300 | 0.4 |
備注：實驗中每管需要300μL。
4、 樣本測定（在EP管中加入下列試劑）
試劑名稱（μL） | 對照管 | 測定管 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
樣本 | 0.1g | 0.1g | - | - |
緩沖液 | 400 | 400 | - | - |
試劑一 | - | 200 | - | - |
渦旋混勻，置于50℃水浴鍋中反應(yīng)2h，立即沸水浴中10min滅活。（注意不要讓蓋子爆開，以免進(jìn)水，改變了反應(yīng)體系），冷卻至室溫。 | - | - | ||
試劑一 | 200 | - | - | - |
常溫，12000g離心10min，取上清 | - | - | ||
上清液 | 300 | 300 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | - | - | 300 | |
標(biāo)準(zhǔn)品 | - | - | - | 300 |
試劑二 | 200 | 200 | 200 | 200 |
渦旋混勻，沸水浴中準(zhǔn)確顯色5min（注意不要讓蓋子爆開，以免進(jìn)水改變了反應(yīng)體系），冷卻至室溫。 | ||||
蒸餾水 | 500 | 500 | 500 | 500 |
充分混勻后，室溫12000g離心5min，取上清液于1mL玻璃比色皿中測定540nm下的吸光度，分別記為A對照、A測定、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。計算ΔA測定=A測定-A對照，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。空白管和標(biāo)準(zhǔn)曲線只需測1-2次。每個測定管需設(shè)一個對照管。 | ||||
三、S-ACX計算公式
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（y，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測定（y，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x，μmol/mL）。
2. 土壤S-ACX活性計算：
酶活定義：50℃，pH 4.8條件下，每克土壤每小時分解木聚糖產(chǎn)生1μmol還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活性單位。
S-ACX活性（U/g 土樣）=x× V反總÷W÷T×F=0.3×x÷W×F
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.6mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，2h；F：稀釋倍數(shù)。
注意事項：
1. 若樣本ΔA<0.01，可適當(dāng)增大樣本量或者延長50℃反應(yīng)時間后測定；若樣本ΔA>1.5或者A測定＞1.5時，可用蒸餾水稀釋上清液后測定，注意同步修改計算公式中的稀釋倍數(shù)。
2. 建議使用螺旋管，防止沸水浴過程中蓋子爆開，改變反應(yīng)體系。
實驗實例：
1、 取0.1g森林土樣，按操作表進(jìn)行第一步反應(yīng)2h后，取上清液用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=A測定-A對照=0.302-0.049=0.253，帶入標(biāo)曲y=0.5374x-0.1048 （R2=0.9977），計算x=0.666，按樣本質(zhì)量計算S-ACX活性得：
S-ACX活性（U/g 土樣）= 0.3×x÷W×F =3.996 U/g 土樣。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC5730/BC5735 土壤中性木聚糖酶（S-NEX）活性檢測試劑盒
BC5740/BC5745 土壤堿性木聚糖酶（S-BAX）活性檢測試劑盒
土壤酸性木聚糖酶活性檢測試劑盒 土壤酸性木聚糖酶活性檢測試劑盒
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