葡萄糖-6-磷酸酶（G6P）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號: BC3325
規(guī)格: 100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑三：臨用前用4 mL蒸餾水溶解備用。

2. 試劑四：臨用前用4 mL蒸餾水溶解備用。

3. 標準品：10 μmol/mL磷標準液。臨用前用蒸餾水稀釋16倍至0.625 μmol/mL的標準溶液備用。

4. 工作液的配制：試劑二中加入5 mL試劑一充分溶解備用?？梢詫⒐ぷ饕悍盅b后-20℃保存，禁止反復凍融。

5. 定磷試劑的配制：按H₂O:試劑三:試劑四:試劑五（V:V:V:V）=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷劑應為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
產品說明：
葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）是一種水解磷酸化合物的磷酸酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和細胞中，是糖異生過程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保證血糖的動態(tài)平衡方面起著重要的作用。
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和無機磷，利用鉬藍法測定無機磷含量的增加，即可反映G6P活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、低溫臺式離心機、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、研缽/勻漿器、EP管、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件

注意事項：

1. 建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

2. 若A大于1.5或者顯色完成后有沉淀產生，將上清液或者粗酶液用蒸餾水稀釋后再進行測定。

3. 定磷試劑應現(xiàn)配現(xiàn)用，正常顏色為淺黃色，如有變色或變藍則均為失效。

實驗實例：

1. 取0.1g稗草加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，用96孔板測得A測定管=0.254、A對照管=0.171、A空白管=0.047、A標準管=0.357，計算ΔA=A測定管-A對照管=0.254-0.171=0.083，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.357-0.047=0.31，按樣本質量計算酶活得：G6P（U/g 質量）=312.5×ΔA÷ΔA標準÷W=312.5×0.083÷0.31÷0.1=836.6935 U/g 質量。

2. 取0.1g小鼠肝臟加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，用96孔板測得A測定管=0.995、A對照管=0.384、A空白管=0.047、A標準管=0.357，計算△A=A測定管-A對照管=0.995-0.384=0.611，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.357-0.047=0.31，按樣本質量計算酶活得：G6P（U/g 質量）=312.5×ΔA÷ΔA標準÷W=312.5×0.611÷0.31÷0.1=6159.274 U/g 質量。

3. 取0.1g小鼠血清稀釋2倍，直接檢測，用96孔板測得A測定管=0.38、A對照管=0.199、A空白管=0.047、A標準管=0.357，計算ΔA=A測定管-A對照管=0.38-0.199=0.181，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.357-0.047=0.31，按血清計算酶活得：G6P（U/mL）=312.5×ΔA÷ΔA標準×稀釋倍數(shù)=312.5×0.181÷0.31×2=364.9194 U/mL。

相關發(fā)表文獻：

1. Fan X, Hou T, Jia J, et al. Discrepant dose responses of bisphenol A on oxidative stress and DNA methylation in grass carp ovary cells[J]. Chemosphere, 2020, 248: 126110.

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