北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC4360-50T/48S
更新時間：2024-04-16
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1441
010-50973130
產(chǎn)品分類
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草酸含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號: BC4360
規(guī)格: 50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體25 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體2 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
2、 標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入792µL蒸餾水配制成100 µmol/mL草酸標(biāo)準(zhǔn)溶液；
產(chǎn)品說明：
草酸是一種二元羧酸，廣泛存在于植物界中，且在不同領(lǐng)域有著不同的作用：在醫(yī)藥、印染、塑料等工業(yè)生產(chǎn)中，草酸可用作制藥原料、絡(luò)合劑、漂白劑、沉淀劑以及還原劑等；從食品角度看，長期食用草酸含量高的蔬菜，容易引發(fā)關(guān)節(jié)炎、低血鈣、膀胱結(jié)石和腎結(jié)石等疾病，而被認(rèn)為是礦物元素的拮抗物。
Fe3+在pH為2的條件下可以與磺基水楊酸生成紫色絡(luò)合物，在510 nm處有特征吸收峰。草酸及草酸根可以使Fe3+與磺基水楊酸的紫色絡(luò)合物顏色變淺，且Fe3+與磺基水楊酸絡(luò)合物的吸光度隨著草酸量的增加而降低，據(jù)此可由降低的吸光值計算出樣本中草酸的含量。
低檢出限：0.0982 μmol/mL
線性范圍：0.75-25 μmol/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1 mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
組織：按照質(zhì)量（g）：蒸餾水體積（mL）為1:5~10的比例（建議稱取約0.1 g，加入1 mL蒸餾水）充分勻漿，然后加入少許試劑四（約3-5mg），震蕩混勻后置于75℃水浴鍋脫色30 min，期間搖晃2-3次，脫色后常溫3000 r/min離心15 min，取上清置于冰上待測（若組織沉淀與試劑四不能離心去除時，建議將上清多離心幾次；
若一次脫色不全時，建議重復(fù)脫色至溶液呈無色或略呈乳白色）。
1、 分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至510 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將100 µmol/mL的草酸標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為25、20、15、12、6、3、1.5、0.75µmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
試劑名稱（µL） | 空白管 | 測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
試劑一 | 50 | 50 | 50 |
試劑二 | 375 | 375 | 375 |
試劑三 | 25 | 25 | 25 |
蒸餾水 | 50 | - | |
樣本 | - | 50 | - |
標(biāo)準(zhǔn)溶液 | - | - | 50 |
蒸餾水 | 500 | 500 | 500 |
混勻，室溫靜置20 min | |||
于1 mL玻璃比色皿中測定510 nm處吸光值A，分別記為A空白管、A測定管、A標(biāo)準(zhǔn)管。計算ΔA=A空白管-A測定管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A空白管-A標(biāo)準(zhǔn)管。同一批檢測樣本需測1-2個空白管（標(biāo)準(zhǔn)管只需檢測1-2次）。 | |||
注意：如果檢測樣本量大，可以根據(jù)樣本所需按照試劑一:試劑二:試劑三=2:15:1（v:v:v）的比例配制成工作液現(xiàn)配現(xiàn)用，加樣體系為450 µL工作液，50 µL樣本（蒸餾水或標(biāo)準(zhǔn)溶液），500 µL蒸餾水。
三、草酸含量計算
1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以各個標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸，其對應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y= kx+b，將ΔA帶入方程得到x（µmol/mL）。
2、 草酸含量的計算：
草酸含量（mg/g質(zhì)量）= x×V提取×M×10-3÷W=0.09x÷W
V提?。杭尤氲恼麴s水體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；M：草酸分子質(zhì)量90.04；10-3：單位換算系數(shù)，1 µg=10-3 mg。
注意事項：
1. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。
2. 如將試劑一、試劑二與試劑三配成工作液使用時，按照配制比例根據(jù)樣本量所需現(xiàn)配現(xiàn)用，不得一次性配完待用。
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