組織及血
液酸性磷酸酶（ACP）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC2135
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
1、標(biāo)準(zhǔn)品：10μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，臨用前蒸餾水稀釋至0.625μmol/mL備用（可以吸取20μL 10 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液和300μL蒸餾水混合備用），稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)液2-8℃保存一周。
產(chǎn)品說明：
ACP（Acid Phosphatase）在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機(jī)磷酸，常見于巨噬細(xì)胞的溶酶體內(nèi)。ACP常用于前列腺癌的輔助診斷。
在酸性環(huán)境中，ACP催化磷酸苯二鈉水解生成苯*，苯*與4-氨基安*比林和鐵*反應(yīng)生成紅色亞醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通過測定510nm吸光度增加速率，來計算ACP活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
組織樣本：稱取約0.1g組織，加提取液1mL充分研磨，4℃，10000rpm離心10min，取上清液待測。
血漿（血清）：血液可直接用于測定，如果濃度高的話，用提取液稀釋。
二、測定步驟
1、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到510nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。
2、試劑一置于37℃水浴中預(yù)熱30min以上。
3、操作表：

 

三、ACP活性計算
1、按蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 μmol酚為一個酶活力單位。
ACP酶活 (U/mg prot)=[C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V樣]÷(Cpr×V樣)÷T
                      =0.0417× (A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1 μmol酚為一個酶活力單位。
ACP 酶活 (U/g 質(zhì)量)=[C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V樣] ÷(W÷V提取×V樣)÷T
                      =0.0417×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W
3、按血液體積計算
活性單位定義：37℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生1μmol酚為一個酶活力單位。
ACP酶活 (U/mL)=[C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V樣] ÷V樣÷T
                   =0.0417×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.625μmol/mL；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.02mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；T：反應(yīng)時間，15min；V提?。杭尤胩崛∫后w積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項：
1、 試劑一、試劑二和試劑三均需避光保存。
2、 試劑三變藍(lán)綠色后不能再使用。
3、 加入試劑三后必須立即混勻，否則顯色不全。
4、 ACP不穩(wěn)定，尤其在37℃和pH大于7的條件下活力喪失快，因此酸性磷酸酶樣本一般需當(dāng)天準(zhǔn)備；血清樣本中，每毫升血清中加入10mg檸檬酸氫二鈉或者5mg硫 酸氫鈉，使pH降至6.5以下，或5mL血清加入30% 醋 酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。
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