北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：YW2
更新時間：2025-08-25
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：3470
010-50973130
產(chǎn)品分類
考馬斯亮藍法測蛋白含量測定
貨號：YW2
規(guī)格：50T/48
產(chǎn)品簡介 ：
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
在酸性溶液中，考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質(zhì)結(jié)合形成藍色復(fù)合物；該復(fù)合物在 595nm 處有大吸收峰，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比。該方法靈敏度高，適合微量蛋白質(zhì)分析。
聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N，N，N，N—四甲基乙二胺(簡稱TEMED)和催化劑過硫酸銨(簡稱AP)或核黃素(即vitamin B2)的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳
(polyacrylamide gel electrophoresis，簡稱PAGE)
SDS－PAGE是在要電泳的樣品中加入含有SDS和β-巰基乙醇(或者DTT)的樣品處理液，SDS可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵，破壞蛋白質(zhì)分子的二級和三級結(jié)構(gòu)，β-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)。SDS還與蛋白質(zhì)結(jié)合使蛋白質(zhì)－SDS復(fù)合物上帶有大量的負電荷，這時各種蛋白質(zhì)分子本身的電荷*被SDS掩蓋。這樣電泳時，就消除了各種蛋白質(zhì)本身電荷及結(jié)構(gòu)上的差異，電泳速度只是與蛋白質(zhì)分子量有關(guān)。用本法測定蛋白質(zhì)的分子量只需根據(jù)待測蛋白質(zhì)在已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)圖中的位置，就能得知分子量。
試驗中所需的儀器和試劑：
酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板、移液器和蒸餾水。
產(chǎn)品內(nèi)容 ：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 瓶，4℃保存。
操作步驟 ：
一 、 樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取 ：
液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。
組織樣品：準(zhǔn)確稱取約 0.1 g 樣品，加 1mL 提取液（ 自備，根據(jù)需要可以是酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水） ，冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測液。 （動物樣品常常需要稀釋）
二 、 吸光值測定 ：
1. 分光光度計儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長到 595nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 空白 管： 取 1mL 玻璃比色皿， 加入 200µL 蒸餾水， 1000µL 試劑一， 混勻后室溫靜置 10min， 于 595nm測定吸光度，10~20min 內(nèi)完成測定，記為 A 空白管。
3. 標(biāo)準(zhǔn) 管： 取 1mL 玻璃比色皿， 加入 200µL 標(biāo)準(zhǔn)液， 1000µL 試劑一， 混勻后室溫靜置 10min， 于 595nm測定吸光度，10~20min 內(nèi)完成測定，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測定 管：取 1mL 玻璃比色皿板，加入 200µL 待測液，1000µL 試劑一，混勻后室溫靜置 10min，于595nm 測定吸光度，10~20min 內(nèi)完成測定，記為 A 測定管。
蛋白質(zhì)含量 計 算 ：
C 待測（µg/m L）= C 標(biāo)準(zhǔn)管×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)=50×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)
C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)品蛋白質(zhì)濃度，50µg/mL。
注意事項 ：
1．加考馬斯亮藍后，在 10~20min 內(nèi)吸光值相對較穩(wěn)定，因此須在 10~20min 完成比色。
2．不宜用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，測完成后立即用 95%乙醇沖洗。
3．測定前用 1~2 個樣做預(yù)實驗，確保蛋白濃度在 0~100µg/ml 范圍內(nèi)，否則需要做相應(yīng)稀釋。
考馬斯亮藍法測蛋白含量測定訂購說明：
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動以訂貨當(dāng)日新價格為準(zhǔn)。
4、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整，因超過截止時間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。
運輸說明：
1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中。
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