甲苯胺藍染色液(硼酸鹽法)

    甲苯胺藍(Toluidine Blue O)是一種常用的人工合成染料, 屬于醌亞胺染料類。這類染料主要含有胺基和醌型苯環(huán)兩個發(fā)色團，從而成色原顯色。甲苯胺藍中的陽離子有染色作用, 組織細胞的酸性物質(zhì)與其中的陽離子相結(jié)合而被染色。甲苯胺藍不僅含有兩個發(fā)色團，還含有兩個助色團，能促使染料產(chǎn)生電離成鹽類, 幫助發(fā)色團對組織產(chǎn)生染色力, 使切片上的組織細胞著色，可染細胞核使之呈藍色；肥大細胞胞質(zhì)內(nèi)含有肝素和組織胺等異色性物質(zhì)遇到甲苯胺藍可呈異染性紫紅色。甲苯胺藍染色液(Toluidine Blue，0.5%,硼酸鹽法)由于硼酸鹽緩沖液呈強堿性，更利于組織細胞的著色。

操作說明：（僅供參考）

(一)肥大細胞染色

1、脫蠟蒸餾水。

2、根據(jù)切片厚度和組織的不同，浸染于甲苯胺藍染色液。

3、蒸餾水或去離子水輕輕沖洗。

4、 (可選)0.5%冰乙酸分化，直到細胞核和顆粒清晰可見。

5、快速95%和無水乙醇脫水。

6、二甲苯透明，封固。

染色結(jié)果：肥大細胞呈紫紅色；背景呈淡藍色。

(二)軟骨染色

1、石蠟切片入二甲苯2次。

2、系列乙醇各。

3、自來水洗2min。

4、入Toluidine Blue O Stain浸染。

5、自來水洗2min，濾紙吸干水分。

6、丙酮分化軟骨細胞呈紫藍色清楚可見。

7、逐級乙醇脫水。

8、二甲苯透明，中性樹膠封固。

染色結(jié)果：軟骨、成骨細胞呈紫紅色；背景呈淡藍色。

(三)細胞涂片染色

1、用20%的乙醇溶液稀釋甲苯胺藍染色液, 一般要求稀釋到0.1%即可。

2、細胞涂片后，立即放入95%的乙醇中固定，取出放在紙巾上。

3、滴加稀釋后的甲苯胺藍染色液進行滴染，加蓋玻片讓染料滲透到細胞中。

4、后將玻片豎起，稍加壓力，使多余染料被紙巾吸去。

5、無需干燥，直接鏡檢。

染色結(jié)果：細胞核、淋巴細胞呈深藍色；核仁呈紫紅色；紅細胞呈橘紅；細胞質(zhì)、單核細胞呈淡藍色。

(四)原位雜交染色

1、用蒸餾水或去離子水稀釋到相應(yīng)的濃度，憑經(jīng)驗一般稀釋比例大于1:100。

2、玻片在稀釋好的染色液中短暫浸泡。

3、在蒸餾水或去離子水浸泡數(shù)次。

4、按需求進行壓片固定。

注意事項：

1、*次使用本試劑時建議先取1-2個樣品做預(yù)實驗。

2、針對于胃粘膜組織、軟骨組織等較難著色組織的染色，浸染于甲苯胺藍染色液的時間應(yīng)相應(yīng)延長。

3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

相關(guān)文獻：

《Loading icariin on titanium surfaces by phase-transited lysozyme priming and layer-by-layer self-assembly of hyaluronic acid/chitosan to improve surface osteogenesis ability》 作者:Yunjia Song,Aobo Ma,Jia Ning,Xue Zhong,Qian Zhang,Xu Zhang,Guang Hong,Ying Li,and Changyi Li 期刊:International journal of nanomedicine 影響因子:4.37 PMID:30425487
《Electroacupuncture promotes peripheral nerve regeneration after facial nerve crush injury and upregulates the expression of glial cell-derived neurotrophic factor》 作者:Jing Fei, Lin Gao, Huan-Huan Li, Qiong-Lan Yuan,and Lei-Ji Li, MD 期刊:Neural Regeneration Research 影響因子:2.472 PMID:30632508
 

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